Tre gånger har Serena Williams vunnit Franska mästerskapen, men det blir ingen fjärde gång i år.
35-rankade Sofia Kenin slog Williams efter att ha vunnit första set tämligen enkelt, 6–2, och sedan skaffat sig liten matchboll genom att bryta fram till 6–5 i det andra setet.
Därefter lyckades den 20-åriga amerikanskan hålla nerverna i styr och serva hem segern på den andra matchbollen till 7–5 i det andra setet.
Serena Williams hade en dålig dag och spred slagen omkring sig. Flera gånger under matchen fick hon frustrerade utbrott mot sig själv.
Det är första gången sedan hon förlorade mot Alize Cornet i Wimbledon 2014 som Williams får lämna en grand slam-turnering redan i den tredje omgången.
Förlusten sätter också käppar i hjulet för tennisikonens ambition att vinna sin 24:e grand slam-titel och därmed tangera rekordet i antalet turneringssegrar som Margaret Court har.
Världsettan utslagen
21-åriga Osaka fick respass mot 42:a rankade tjeckiskan Siniakova i Paris. En förlust som sätter stopp för Osakas sexton raka vinster i Grand Slam-turneringar – som inkluderar titlar i både U.S. Open och Australian Open.
Osaka gjorde 38 oprovocerade misstag och matchen var över på 77 minuter.
För Siniakova väntar nu åttondelsfinal.
– Roland Garros-banan lockar fram det bästa ur mig och jag hoppas att det här fortsätter, sa Siniakova enligt BBC.
Halep vidare
För Siniakova är det första gången hon når den fjärde omgången i en grand slam-turnering i singel. I dubbel gick hon däremot hela vägen i Paris förra året tillsammans med sin landsmaninna Barbora Krejcikova.
En förhandsfavorit som däremot pallade trycket under lördagen var Simona Halep. I fjol vann rumänskan sin första grand slam i Paris, och än så länge har hon fortfarande chansen att upprepa bedriften.
På lördagen tog hon sig lekande lätt till den fjärde omgången efter att ha vunnit med klara 6–2, 6–1 mot ukrainskan Lesia Tsurenko.
Tredjeseedade Halep bröt sin motståndares serve hela åtta gånger i en ensidig match som var över på 55 minuter.